校园春色 亚洲色图 H22小鼠肝癌细胞的培养材干及方法
发布日期：2024-11-04 06:12 点击次数：56
一、细胞简介： 细胞称呼：H22小鼠肝癌细胞 平台编号:zl-056254 该细胞系分手自小鼠腹水，由大连医科学院缔造。 细胞特质 1）开端：小鼠腹水 2）风景：淋巴母细胞，悬浮助长 3）含量：>1x106细胞数 4）规格：T25瓶约略1mL冻存管包装 5）用途：仅供科研使用。 二．培养基及培养冻存要求准备： 1）准备RPMI-1640培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2）培养要求：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 三．细胞解决： 1）冻存细胞的复苏： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中飞速摇晃解冻，加入到含4-6mL透澈培养基的离心管中搀杂均匀。在1000RPM要求下离心3-5min，弃去上清液，透澈培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml透澈培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下不雅察细胞助长情况和细胞密度。 2）细胞传代：要是细胞密度达80%-90%校园春色 亚洲色图，即可进行传代培养。 关于悬浮细胞校园春色 亚洲色图，传代可参考以下方法： 悬浮景色下助长的细胞校园春色 亚洲色图，不错通过向培养瓶中添加透澈培养基来保管细胞的助长景色，一般情况下细胞密度保管在1×105~1×106个/mL（不同细胞对密度要求不同，）不错保管细胞的同样助长。如需分瓶不错将细胞悬液集结到离心管中1000rpm，离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照讲明书要求确立的新的透澈培养基以保执细胞的助长活力，后续传代把柄骨子情况按1:2~1:5的比例进行。 3）细胞冻存:收到细胞后提议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续现实使用。 底下T25瓶为例； 1.细胞冻存时按照细胞传代的经由集结消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推选冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml. 2.1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分派到一个冻存管中将细胞分派到冻存管中，标注好称呼、代数、日历等信息。 3.将要冻存的细胞置于次第降温盒中，-80度雪柜中过夜，之后转入液氮容器中储存。同期记载好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。 四、输送和保存 干冰输送及复苏好存活细胞 （1）1mL冻存管包装干冰输送，收到后-80度雪柜保存过夜后转入液氮或径直复苏，若发现干冰已蒸发干净、冻存管瓶盖零散、糟蹋及细胞有稠浊，请立即与咱们关系。 （2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞禁受后的解决方法操作。 五、细胞禁受后的解决 1）收到细胞后，75%乙醇消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱搁置约2-3h，若发现培养瓶糟蹋、有液溢出及细胞有稠浊，请拍照后实时关系咱们。 2）请在4或5X显微镜下阐明细胞景色，同期给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外不雅像片一张留存，看成售后时收到时细胞景色的依据。 3）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱搁置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照讲明书细胞培养要求新配制的透澈培养基）。 4）备注：输送用的培养基（灌液培养基）不行再用来培养细胞，请换用按照讲明书细胞培养要求新配制的透澈培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代提议T25培养瓶1：2传代。 智立中特（武汉）生物科技有限公司是一家集生物研发，分娩，销售，售后为一体的高新技艺产业公司。领有载体质粒，载体，国表里微生物菌种资源，感受态细胞，培养基，细胞株等平凡的分娩销售线。 质粒载体居品： 提供多样类型载体宿主，基因种属类型，抗性，策动并构建质粒：大肠杆菌抒发载体；哺乳动物抒发载体；酵母抒发载体；虫豸抒发载体；植物抒发载体；广;腺病毒载体...常用有pACYC184；pACYCDuet-1；pASK-IBA5plus+FUS(东说念主基因）；pAX01；pBABE-Puro；pBAD24 pBI121；pBIFC-bFosVC155；pBIFC-VC15；pCDFDuet-1；pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro；pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro；pBIFC-VN155(I152L)addgene27097；pCDH-MSCV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro；pCAGGS；pBiFC-VN173(Plasmid#22010)；pBlueScriptSK(+)；pBlueScriptIISK(+)；pBV220；pCas；pCas9 pBR322；pBT3-STE；pBudCE4.1以及邻接鼎新质粒RP4；pGL4.25[luc2CP/minP];pGR106;pIRES2-AcGFP1-Nuc;psfGFP;pHEN1;pNL1.1[Nluc];pBBR1-GFP；pBMTB-5;pBMTB-4;pBMTB-3;pBMTB-2;pCAMBIA0305.1;pCX-DR;;pGreenII0800-miRNA;pK7GWIWG2(I);pRARE;pDG1663 质粒菌种居品： E.coliNissle1917；USA300：大肠杆菌JM108；希瓦氏菌属MR-1；E.coliW3110野生型；酿酒酵母W303a；酿酒酵母invsc1；酿酒酵母BY4741；酿酒酵母BY4742；毕赤酵母SMD1168H；PseudomonasputidaKT2440；E.coliMC1061；枯草芽孢杆菌WB800；根癌农杆菌EHA105；根癌农杆菌GV3101；CEN.PK2-1D；CEN.PK2-1C；全耐药鲍曼不动杆菌；哈维弧菌BB170 菌种居品： 提供模式菌种，科研菌种，普通菌种等菌种资源，有证质控样品等微生物表率品，芽孢悬液。常用药典菌种如：大肠埃希氏菌CMCC（B）44102、黑曲霉CMCC（F）98003,白色念珠菌CMCC(F)98001,枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501,铜绿假单胞菌CMCC（B）10104,生孢梭菌CMCC（B）64941;常用益生菌：长双歧杆菌（Bifidobacteriumlongum）,嗜热链球菌（Streptococcusthermophilus），鼠李糖乳杆菌（Lactobacillusrhamnosus），类干酪乳杆菌（Lactobacillusparacasei），干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei）；常用真菌：松口蘑Tricholomamatsutake，灰葡萄孢bio-81601cfcc50437Botrytiscinerea；灵芝，香菇，茯苓等 原代细胞和细胞系居品： 现取不同组织现分：不同开端东说念主/鼠/兔/猪等不同组织如肺、气管、支气管、甲状腺、胰腺、垂体、肾上腺、扁桃体、胸腺、肾、膀胱、输尿管、前方腺、腹黑、血管。常用原代细胞有：气管上皮细胞；前方腺上皮细胞；膀胱上皮细胞；输尿管上皮细胞；肾足细胞；内皮祖细胞；输卵管上皮细胞；乳腺上皮细胞 公司提供细胞系东说念主源作念过STR武断，其他作念过种属武断，确保居品无误后方可提供客户，体式冻存或复苏从简客户时候；确保现实班师。常用细胞系有：WB-F344细胞；RG2[D74]细胞；NRK细胞；A7r5细胞；L6细胞；UMNSAH/DF-1细胞；MDBK(NBL-1)细胞；MDBK细胞；CCC-SMC-1细胞；PtK1(NBL-3)细胞；Mv1Lu细胞；Mv.1.Lu(NBL-7)细胞；F81细胞；CRFK细胞；MLTC-1细胞；MS1细胞；C3H/10T1/2,Clone8细胞；GL261细胞；P3X63Ag8.653细胞；HCC38细胞；ZR-75-30细胞；SK-LU-1细胞；NCI-H2087细胞；SK-N-MC细胞；Hs895.T细胞
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