中国 拳交 NIH/3T3小鼠胚胎成纤维细胞的传代及复苏！
发布日期：2024-11-04 06:26 点击次数：69
一．小鼠胚胎成纤维细胞简介： 细胞称号：NIH/3T3小鼠胚胎成纤维细胞 平台编号:zl-056341 与原始的立地交配3T3和近交系BALB/c3T3建株智力相似，NIH/3T3，是从NIHSwiss小鼠胚胎培养物中开采的高度战争收敛的连系细胞株。为了扶直在风光学特征上更顺应于进行转移分析的亚株，开采的NIH/3T3细胞株又进行了五轮以上亚克隆。这株细胞对DNA转移及转染盘考格外有效。检测标明肢骨发育荒唐病毒(鼠痘)阴性。 细胞特质 1）源头：小鼠胚胎 2）风光：成纤维细胞，贴壁滋长 3）含量：>1x106细胞数 4）规格：T25瓶不祥1mL冻存管包装 5)用途：仅供科研使用。 二、小鼠胚胎成纤维细胞培养 培养基及培养冻存条款准备： 1)准备DMEM基础培养基86% 小牛血清10% P/S青霉素-链霉素1% MEMNEAA非必需氨基酸1% SodiumPyruvate bingsuan1% GlutaMAX-1谷氨酰胺1% 备注：NIH/3T3细胞关于血清较为敏锐，弗成使用胎牛血清（FBS）培养该细胞切勿使细胞滋长过密，每成全少传代2次，保证细胞密度不逾越80% 2）培养条款：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3)冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 三．小鼠胚胎成纤维细胞经管： 1）冻存细胞的复苏： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中连忙摇晃解冻中国 拳交，加入到含4-6mL完竣培养基的离心管中搀杂均匀。在1000RPM条款下离心3-5min中国 拳交，弃去上清液，完竣培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完竣培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下不雅察细胞滋长情况和细胞密度。 2）细胞传代：淌若细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 关于贴壁细胞传代不错参考以下智力： 1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加入0.25％（w/v）胰卵白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞不错符合延迟消化时辰），然后在显微镜下不雅察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并零星，连忙拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10